@Legestr glaz
Il suffit simplement de lire Chanteclerc
... " Nous avons utilisé des cellules Vero CCL-81 pour l’isolement et le passage initial. Nous avons cultivé des cellules Vero E6, Vero CCL-81, HUH 7.0, 293T, A549 et EFKB3 dans du milieu essentiel minimal Dulbecco (DMEM) additionné de sérum bovin fœtal inactivé par la chaleur (5 % ou 10 %) et d’antibiotiques/antimycotiques (GIBCO, https://www.thermofisher.comLien externe). Nous avons utilisé des échantillons d’écouvillons NP et OP pour l’isolement du virus. Pour l’isolement, la dilution limite et le passage 1 du virus, nous avons pipeté 50 μL de DMEM sans sérum dans les colonnes 2 à 12 d’une plaque de culture tissulaire à 96 puits, puis pipeté 100 μL d’échantillons cliniques dans la colonne 1 et dilué en série 2 -replier sur l’assiette. Nous avons ensuite trypsinisé et remis en suspension des cellules Vero dans du DMEM contenant 10 % de sérum bovin fœtal, 2 × pénicilline/streptomycine, 2 × antibiotiques/antimycotiques et 2 × amphotéricine B à une concentration de 2,5 × 105 cellules/mL.
Nous avons ajouté 100 μL de suspension cellulaire directement aux dilutions d’échantillons cliniques et mélangé doucement par pipetage. Nous avons ensuite cultivé les cultures inoculées dans un incubateur humidifié à 37 ° C dans une atmosphère de 5% de CO2 et observé quotidiennement les effets cytopathiques (CPE). Nous avons utilisé des tests de plaque standard pour le SRAS-CoV-2, qui étaient basés sur les protocoles du SRAS-CoV et du coronavirus du syndrome respiratoire du Moyen-Orient (MERS-CoV) (9,10)."...
A retrouver ici, dans cette étude.
https://wwwnc.cdc.gov/eid/article/26/6/20-0516_article